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澳洲胎牛血清的制備過程來了解下
更新時間:2019-10-07瀏覽:1795次
   澳洲胎牛血清是一種性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應取自剖腹產(chǎn)的胎牛。顯然,胎牛血清是品質高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分少。
  澳洲胎牛血清主要用途:
  牛血清是細胞培養(yǎng)中用量大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,常用于動物細胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。
  1.提供對維持細胞指數(shù)生長的激素,基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。
  2.提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結合或調變它們所結合的物質活力。
  3.有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到解毒作用。
  4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質上所需因子來源。
  5.起酸堿度緩沖液作用。
  6.提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。
  具體澳洲胎牛血清制備操作方法如下:
  首先、血液采集
  1、挑選出大約8月齡以上的健康妊娠母牛,經(jīng)剖腹獲取小牛。
  2、將小牛清洗干凈后,側放在萬級潔凈房間內的采血臺上,固定四肢及頭部。
  3、用來蘇水清洗心臟外部,刮去心臟外部牛毛,露出心臟外部一側皮膚,用2%碘酒擦拭消毒。
  4、在心臟部位切開一道10厘米左右的切口,取出近心血管,先用2%碘酒消毒,再用75%的酒精消毒,用止血鉗夾住血管,切開1厘米左右的切口進行插管,插好管后打開血管的止血鉗,讓牛血順采血管流入另一個潔凈房間內的采血瓶中。
  5、采血瓶采血前經(jīng)干烤滅菌(180℃2小時)后,按無菌操作注入10毫升左右經(jīng)高壓滅菌的生理鹽水后加塞封口,于采血前半小時放入37℃恒溫箱備用。采血前先晃動瓶內生理鹽水,使其充分濕潤瓶壁后倒出,再進行采血并加塞封口。將采血后的采血瓶放37℃恒溫室2小時,再放入4℃冷庫4小時以備離心。
  第二步、離心
  將準備好的采血瓶放入離心套筒調好平衡后,對稱放入離心機,按1800轉/分鐘離心50分鐘后,放入4℃冷庫備用。
  第三步、抽血清
  取出4℃冷庫離心好的采血瓶,注意輕抬輕放,以免將下層血塊和血清混層。將經(jīng)過高壓滅菌裝有兩孔瓶塞的5000ml大瓶的抽氣孔一端的管子接好空氣濾器,再接到壓縮機抽氣口上。打開壓縮機,用抽血清孔的管子輕輕抽取采血瓶內的上清液,注意控制好抽管,避免抽到下層血塊。將抽好的血清分裝,即為粗制胎牛血清,放入-20℃冷庫冷藏備用。
  第四步、澳洲胎牛血清過濾
  1、將-20℃冷庫內的粗制血清取出化凍。
  2、將化凍后的粗制血清用經(jīng)過高壓滅菌的12層醫(yī)用脫脂棉紗布進行初濾。
  3、把初濾后的血清倒入大罐進行混合。
  4、將裝好濾芯的濾器做密封性試驗和發(fā)泡試驗合格后,經(jīng)過高壓滅菌,在潔凈室內用無菌操作法將濾器按濾柱孔徑由大到小的順序進行組裝,并裝上壓力表。把濾器大孔徑一端和蠕動泵出口進行連接。
  5、用蠕動泵將大罐內的血清送入濾器進行過濾。
  6、將濾出的血清在百級凈化操作臺上進行分裝后,即為精制胎牛血清,送-20℃冷庫儲存。
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